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IL-2试剂盒的实验原理和操作过程详述
点击次数:573 发布时间:2017-03-17
   IL-2试剂盒的检测目的和实验原理

  1.检测目的。IL-2试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中白细胞介素2(IL-2)含量。

  2.实验原理。

  IL-2试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠白细胞介素2(IL-2)水平。用纯化的小鼠白细胞介素2(IL-2)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入白细胞介素2(IL-2),再与 HRP 标记的白细胞介素2(IL-2)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的白细胞介素2(IL-2)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中小鼠白细胞介素2(IL-2)浓度。

  IL-2试剂盒的样本保存:请尽早检测,2-8℃保存一天;需更长时间须冷冻(-20℃或-70 ℃)保存。如需周期收集样本,请将样本及时分装标号后,置-20℃或-70 ℃保存。

  IL-2试剂盒的操作步骤

  IL-2试剂盒使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。

  根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1:1稀释后加入50ul于反应孔内。

  加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时。

  甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。每孔加入60ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。

  甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。避免光照。

  取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。在450nm波长处测定各孔的OD值。

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