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简单易懂的MMP-9检测试剂盒产品说明
点击次数:470 发布时间:2017-05-15
   MMP-9检测试剂盒的原理:

  酶谱法的基本过程是先将样品进行SDS-聚丙烯酰胺(SDS-PAGE,含0.1%明胶)电泳分离,然后在有二价金属离子存在的缓冲 系统中使样品中的MMP-9恢复活性,在各自的迁移位置水解凝胶里的明胶,zui后用考马斯亮蓝将凝胶染色,再脱色,在 蓝色背景下可出现白色条带,条带的强弱与MMP-9活性成正比。

  复性原理:在电泳过程中,SDS与样品中的MMPs结合(当然是可逆性结合),破坏其氢键、疏水键而使MMPs不能发挥其分解明胶的作用,而只有当将胶置Trition中洗脱(zui好是放在摇床上摇,30min/次,做2次或15min/次,4次。静置于Trition中是不妥的。)时,由于SDS被Trition结合而去除,从而使MMPs恢复了活性。

  MMP-9检测试剂盒的操作步骤:

  1.标准品的稀释:MMP-9检测试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

  2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

  3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

  4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

  5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

  6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

  7.温育:操作同3。

  8.洗涤:操作同5。

  9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.

  10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

  11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

  MMP-9检测试剂盒的结果计算

  以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度。再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

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