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判断胰岛素ELISA试剂盒灵敏度高低的要点
点击次数:510 发布时间:2017-05-22
   胰岛素ELISA试剂盒因其准确性高、灵敏度高、特异性强等因素而广泛应用。那么当我们拿到胰岛素ELISA试剂盒时,如何判断它的灵敏度高低呢?

  其实,胰岛素ELISA试剂盒灵敏度和检测样本有些关联的,如果待测样本中目标蛋白的浓度比较高,则对灵敏度要求相对小一些。如果待测样本中目标蛋白的浓度比较低,则必须考虑灵敏度的问题。

  一般来说,胰岛素ELISA试剂盒曲线上的zui小浓度是比较准确的,低于这个值因为与曲线是个“S"型结构有关,所以结果是有偏差的,是一种估算。再加上实验误差,所以达不到理想的效果。建议选择试剂盒时,应该看曲线上zui小的浓度值,而不是试剂盒上写的灵敏度。

  虽然酶活性调节ELISA方法的灵敏度目前并不十分理想,但在酶活性放大ELISA中,检测的灵敏度远比RIA高。根据质量作用定律。即免疫反应所形成的免疫复合物量与反应物浓度成正比。推测所检测的待测物分子数为1。已知1个摩尔浓度含6.02×1023个分子,那么理论推测酶活性放大ELISA方法的zui低检测限可达1.7×10-24mol/L。

  虽然在实际应用中由于反应条件和试剂纯度以及仪器精度等因素的影响,往往达不到这个水平(大于104个分子),但表明ELISA在灵敏度方面的改进潜力是很大的。

  胰岛素ELISA试剂盒的操作要点

  1.仔细阅读说明书,确定胰岛素ELISA试剂盒在有效期内。按说明书确定所有试剂齐全,以及所有实验额外所需物品,如试管、吸头、移液器、离心机等。

  2.标本制备要规范,每份标本体积要按2-3个复孔以上的量制备(贮存),尽量分装做备份。短期内无法实验者,注意低温保存。

  3.按胰岛素ELISA试剂盒说明书将所用试剂平衡至室温,配制所需试剂。

  4.选择抗体时zui好选择一个单抗和一个多抗进行配对。若选择两个单抗,必须识别不同表位的抗体,zui好从同一家公司选择抗体。

  5.一般待测抗原标准曲线的线性范围的可通过将标准品做8次2倍系列稀释从2000pg/ml到15pg/ml。可利用标准的Elsia操作流程、放大试剂盒、第三类试剂、或改变酶底物系统可在一定范围内提高灵敏度。

  如果您对于胰岛素ELISA试剂盒还有其他疑问,咨询我们!

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