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上海百蕊:土壤硝酸还原酶生化法试剂盒,现货供应
点击次数:706 发布时间:2014-11-18

土壤硝酸还原酶Solid-Nitrate ReductaseS-NR试剂盒说明书

测定意义

S-NR催化土壤中硝酸盐还原为亚硝酸盐,是土壤硝态氮还原的关键酶。研究S-NR的活性对合理施肥,降低氮素的损失具有重要意义。

测定原理

S-NR催化硝酸盐还原为亚硝酸盐,NO3ˉ +NADH+H NO2ˉ +NAD +H 2 O;产生的亚硝酸盐能够在酸性条件下,与对氨基苯磺酸及 α - 萘胺定量生成红色偶氮化合物;生成的红色偶氮化合物在 540 nm 有zui大吸收峰,可用分光光度法测定。

需自备的仪器和用品

可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制

试剂一:液体20mL×1瓶,-20保存。

试剂二:液体10mL×1瓶,-20保存

试剂三:液体25mL×1瓶,4保存。

试剂四:液体25mL×1瓶,4保存。    

试剂五:标准品储备液1mL-20保存。

0.1mmol/LNaNO2标准液的配制:用时将试剂五稀释100倍,即取 0.1ml 加蒸馏水定容至 10ml

测定操作表

试剂名称

1mL带盖离心管

测定管

对照管

标准管

空白管

风干土样(g

0.1

0.1

 

 

0.1mmol/LNaNO2μL

 

 

100

 

双蒸水(μL

 

500

 

100

试剂一(μL

375

 

375

375

试剂二(μL

125

 

125

125

      混匀后,盖盖后37℃水浴60min8000g室温离心10min,取上清液

上清液(μL

400

400

400

400

试剂三(μL

250

250

250

250

试剂四(μL

250

250

250

250

混匀,显色20min4000g,室温离心10min,用蒸馏水调零,540nm下读取各管吸光值

注意事项

1、试剂一、试剂二和试剂五在冰上放置,用完立即放回-20

2、标准管和空白管只需测一次。每个测定管设一个对照管。

S-NR活性计算:

单位的定义:24hg土样中产生1μmol NO2ˉ的量为一个 S-NR活力单位。

S-NRU/g=标准品浓度(0.1mmol/L×A测定管-A对照管)÷A标准管-A空白管)÷反应时间(1/24h×反应总体积(0.5mL÷样本质量(0.1g=12×A测定管-A对照管)÷A标准管-A空白管)

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