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抗体储存秘诀,生物化学实验必备
点击次数:1027 发布时间:2016-07-15

抗体由于性质和所使用的储存条件不同,其存储的“保质期”可能从几周到几年不等。尽管每个抗体存储的zui佳条件是独特的,但还是能够总结出一些关于抗体存储建议和一般准则。

 

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一:低温对抗体的保存至关重要

 

一般来说,抗体存放在≤4℃的清洁,灭菌的玻璃或塑料管。贮存在室温下通常会由于微生物的生长导致抗体退化和/或失活。抗体储存液放在4℃环境中1天或者几周内其活性不会受到明显影响另外,抗体中可以加入终浓度为50%的甘油或乙二醇储存于-20℃。通常我们为了避免反复冻融,可以分装抗体。还可以加入抗微生物药物(如叠氮化钠或硫柳汞)以避免微生物的生长。带有标记的抗体通常可以在甘油或乙二醇中于-20℃保存1-2年。但是,在冷冻保护剂的污染物可能会影响酶的活性。

 

一些研究人员发现多克隆抗体在血清中于-20℃保存十年其活性损失不大。然而,一旦抗体被纯化后,储存在50%的甘油中于-20℃保存,即使没有冻融,其活性的损失也可以观察到,尽管其进程仍然非常缓慢。单克隆抗体可以用两种方式保存:*,保存在50%的甘油存放于-20℃;第二,也是比较好的方式,将其保存在饱和硫酸铵于4℃或-20℃(4℃更好)保存。在大多数情况下,冻干的抗体是存放在-20℃

 

二:向抗体储存液中加入抗氧化剂是防止抗体因氧化失效的关键步骤

 

氧化反应是某些酶,尤其是巯基酶的共同问题。为了防止氧化反应对抗体的破坏,我们可以向抗体中加入一些还原剂(如二硫苏糖醇(DTT)或 巯基乙醇(2-ME))。实验证明:越高的pH环境和温度,有酶活性的抗体的保存时间越短。此外,加入0.1mM的铜离子,其氧化率增加;而加入金属螯合剂EDTA可增加有效期。

 

三:蛋白质稳定剂和抗生素对抗体的稳定储存发挥着重要作用

 

蛋白质稳定剂可以延长大多数蛋白质在4℃或-20℃的保质期。而25-50%的甘油或乙二醇等防冻剂有助于稳定抗体,防止在-20℃环境中形成冰晶,避免其破坏蛋白质的结构。蛋白酶抑制剂的加入可以防止抗体发生水解反应导致其失活。而抗微生物药物,如zui终浓度在0.02-0.05%(W / V)的叠氮化钠(NaN3的)或终浓度为0.01%(W / V)的硫柳汞可以抑制微生物的生长。

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